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兔肝内胆管上皮细胞 YB-Rb8052

兔肝内胆管上皮细胞;促销大行动,现在买,最实惠

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兔肝内胆管上皮细胞

原代细胞传代方法:

一、贴壁细胞的消化法传代

1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。

2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使瓶底细胞都浸入溶液中。

3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时,弃去消化液,加入培养液终止消化。

4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

二、悬浮细胞的传代

1、直接传代

1)让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2-2/3

2)用吸管吹打形成细胞悬液后,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养。

2、离心法传代

1)将细胞连同培养液一并转移到离心管内,离心800-1000rpm5分钟。

2)去除上清,加新的培养液一离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液。

3)将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养。

原代细胞培养中的6个常见错误

错误#1:一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间

纠正#1:原代细胞对解冻过程非常敏感,因此将小瓶置于37℃水浴中,保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶,并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪,以便可以立即用于接种细胞,并置于培养箱中。

 

错误#2解冻小瓶后直接离心原代细胞

纠正#2我们不建议在解冻后离心细胞,因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住,在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO

 

错误#3允许原代细胞变得过于融合

纠正#3当生长至100%汇合时,原代细胞可以变得衰老。记住,原代细胞不是100%纯,因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95%融合时,对原代细胞进行传代培养。

 

错误#4传代原代细胞时过度胰蛋白酶消化

纠正#4当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶,因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。我们特别推荐专门为原代细胞配制的胰蛋白酶中和溶液,但也可以使用10%血清或大豆胰蛋白酶抑制剂。

 

错误#5原代细胞可以很容易地重新冻存

纠正#5通常我们不推荐重新冻存原代细胞,因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感,重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

 

错误6原代细胞可以无限的增殖

纠正#6与细胞系不同,原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外,如果你正在使用一个增值困难的细胞类型,你应该密切监测细胞形态,因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移,大量生长从而成为主要细胞。


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