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T4 RNA连接酶1 YB7703

T4 RNA连接酶1

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T4 RNA连接酶1

T4 RNA 连接酶1催化3’→5’磷酸二酯键的形成,使核苷酸的5’-磷酸末端和3’-羟基末端连接,伴随着ATP水解为AMP和PPi。T4 RNA 连接酶1的作用底物包括单链RNA、DNA及二核苷焦磷酸,它可催化ssDNA和RNA的连接,相对于ssDNA,该酶对RNA分子的连接和环化效率更高。T4 RNA连接酶I

组分

组分名称数量T4 RNA Ligase1 (10 U/μl)100μl10×T4 RNA Ligase Buffer250μl10mM ATP100μl50% PEG 8000500μl

应用

  • 连接单链RNA和DNA

  • RNA 3’末端标记

  • RNA和DNA分子内和分子间连接

  • 合成单链寡脱氧核苷酸

  • 蛋白质中掺入非天然氨基酸

活性定义

1单位指在1×T4 RNA Ligase Buffer 中,37℃条件下,30分钟内将1nmol的5’-[32P]rA16转化为磷酸盐不溶物质所需要的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

使用注意事项

1.1× T4 RNA Ligase Buffer:50mM Tris-HCl pH 7.5,10mM MgCl2,1mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度1mM ATP。
2. 最佳反应温度37℃,65℃ 10min可使该酶失活。
3. 该酶的连接底物无论是ssDNA还是ssRNA均需要5’-磷酸化或预腺苷化。
4. 该酶不能连接双链DNA或RNA。
5. 加入终浓度5~10% PEG 8000或增加孵育时间可提高连接效率。


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