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人D-乳酸(D-LA) ELISA试剂盒 YB-DLA-Hu

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¥ 2800.00 /盒
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的: 本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本 D-乳酸(D-LA)含量。 

检测范围60μg/L -1600μg/L 

实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人D-酸(D-LA)水平。用纯化的人 D-乳酸(D-LA)抗体包被 微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加 D-乳酸(D-LA),再与 HRP 标记的 D-乳酸(D-LA) 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻 底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB HRP 酶的催化下 转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样品中的 D-乳酸(D-LA)呈正相关。用酶 标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标 准曲线计算样品中人 D-乳酸(D-LA)浓度。

试剂盒组成:

 

Reagent

Quantity

酶标包被板

12well×8strips

标准品 3200μg/L

1×0.5ml








 

标准品稀释液

1×1.5ml

酶标试剂

1×6ml

样品稀释液

1×6ml

显色剂 A 

1×6ml

显色剂 B 

1×6ml

终止液

1×6ml

30 倍浓缩洗涤液

1×20ml×30flod

说明书

1

封板膜

2

密封袋

1

样本处理及要求

  1. 血清: 室温血液自然凝固  10-20    分钟,离心20    分钟左右(2000-3000    转/分)   。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

  2. 血浆: 应根据标本的要求选择  EDTA    或柠檬酸 钠作为抗凝剂,混合  10-20    分钟后,离心 20    分钟左右( 2000-3000    转/分)   。仔细 收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

  3. 尿液: 用无菌管收集 ,离心  20     分钟左右 (2000-3000    转/分)  。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

  4. 细胞培养上清: 检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心  20    分钟左右(2000-3000转/分)   。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用  PBS ( PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml    左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心  20    分钟左右( 2000-3000 转/分)   。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形 成,应再次离心。

  5. 组织标本: 切割标本后,称取重量。加入一定量 的  PBS ,PH7.4 。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持  2-8℃的温度。加入一定量的  PBS(PH7.4) ,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心  20     分钟左右( 2000-3000     转/仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

  6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

  7. 不能检测含  NaN3     的样品,因  NaN3    抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。

操作步骤:

  1.     标准品: 其起始浓度为 3200μg/L(贮液) 。再准备5 个稀释标准品的 EP  管,每个 EP  管中加入 150 μL 的 标 准 品 稀 释 液 , 如 图 所 示 依 次 倍 比 稀 释 成 3200μg/L,1600μg/L,800μg/L,400μg/L,200μg/L,100μg/   L,标准品稀释液(0μg/L)直接作为空白孔。为保证实验 结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液

  2. 加样: 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)   、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液  40 μ l ,然后再加待测样品  10 μ l (样品最终稀释度为  5    倍)   。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3. 温育: 用封板膜封板后置  37℃温育30分钟。

  4. 配液: 将  30    倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

  5. 洗涤: 小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置  30    秒后弃去,如此重复  5    次,拍干。

  6. 加酶: 每孔加入酶标试剂

  7. 温育: 操作同  3。

  8. 洗涤: 操作同  5。

  9. 显色: 每孔先加入显色剂A50 μ l ,再加入显色剂  B50 μ l ,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15分钟.

  10. 终止: 每孔加终止液  50 μ l,终止反应(此时 蓝色立转黄色)。

  11. 测定: 以空白空调零,450nm    波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后  15    分钟以内进行。

注意事项:

  1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡  15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

  2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中 加温助溶,洗涤时不影响结果。

  3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性, 以避免试验误差。一次加样时间最好控制在  5    分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍) 后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数( ×n ×5)  。

  5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6. 底物请避光保存。

  7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必 须以酶标仪读数为准.

  8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物 处理。

  9. 本试剂不同批号组分不得混用。

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD    值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的  OD值由标准曲线查出相应的浓度; 再乘以稀释倍数; 或用标准物的浓度与  OD    值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的  OD    值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

试剂盒性能:

1. 样 品线性 回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

2.批内与批见应分别小于  9%和  11%

3.保存条件及有效期:

a.试剂盒保存: 2-8℃。

b.有效期: 6个月


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