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CCK8检测试剂盒 (Cell Counting Kit) YB7001CK8

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CCK8检测试剂盒 (Cell Counting Kit) 

产品简介:

CCK-8 检测试剂盒,是一种基于 WST-8 而广泛应用于 细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。 CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分。WST-8 在 电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色 的 formazan (参考图 1) 。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大, 则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数 目呈线性关系 (图 2) 。


储存条件及有效期:

4℃一年;-20℃两年,长期保存务必避光保存。


操作说明:

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

  1. 制作标准曲线:

    1.1 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞;

    1.2 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做5-7 个细胞浓度梯度,每组 4-6 个复孔;

    1.3 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁,然后每 100μL 培养基加 10μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值,以细胞数量为横坐标,OD 值为纵坐标,制作标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。

  2. 细胞活性检测:

    2.1 在 96 孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养 24 小时;

    2.2 向每孔加入 10μL 的 CCK-8 溶液(注意不要产生气泡);

    2.3 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时;

    2.4 酶标仪 450 nm 处测定吸光度。

  3. 细胞增殖-毒性检测:

    3.1 在 96 孔板中接种细胞悬液(100μL/孔),将培养板放在培养箱中预培养 24 小时;

    3.2 向培养板加入不同浓度的待测药物;3.3 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间;

    3.4 向每孔加入 10μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡);

    3.5 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时;

    3.6 酶标仪 450 nm 处测定吸光度。

  4. 计算公式细胞存活率:

    =[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100%抑制率=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100%

    As:实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ;

    Ac:对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液,不含药物) ;

    Ab:空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液,不含细胞、药物) 。


注意事项:

  1. CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时,但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼观察显色程度,根据细胞种类而定,需要摸索条件,CCK-8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。

  2. 用 96 孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。

  3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化反应,所以还原剂 (例如一些抗氧化剂) 会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。

  4. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。

  5. 加入药物中如含有金属化合物或金属螯合物,对 CCK-8 显色有影响。

  6. 培养基中的酚红不会影响实验结果,酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消除。

  7. 本产品可以检测 Ecoli,但不能检测酵母细胞。向 100μL 培养液中加入 10μL CCK-8 溶液,并培养 1-4 小时或过夜。

  8. CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深。

  9. CCk-8 检测时,建议同时测定细胞的具体数量,做标准曲线。

  10. 建议采用多通道移液器,以减小平行孔间的差异。

  11. 以下方法可以终止 CCK-8 反应(96 孔板):

    11.1.在显色反应后,将培养板放置 4°C 冰箱内。

    11.2.每孔加 10μL 的 0.1M HCl 溶液。

    11.3.每孔加 10μL 的 1% (w/v)SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。(注意:反应停止后,应在 24 小时内测定。)

  12. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

  13. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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