Chikungunya Virus E1 Antigen (CHIKV E1) ELISA KIT

基孔肯雅热病毒E1抗原(CHIKV E1)ELISA检测试剂盒

产品简介：

基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒（CHIKV）引起的一种感染。该病于1952年在坦桑尼亚首次被发现，其名称来源于基马孔德语中表示“身体扭曲变形”的词汇。由于基孔肯雅热迅速的地理范围扩张、反复暴发、缺乏有效的抗病毒治疗方法以及可能导致高发病率，该病已成为全球关注的公共卫生问题。基孔肯雅病毒与奥尼翁尼翁病毒（ONNV）密切相关，两者具有相似的遗传和临床特征。其症状包括发热和关节疼痛。这些症状通常在感染后两到十二天出现。其他症状可能还包括头痛、肌肉疼痛、关节肿胀和皮疹。症状通常在一周内得到改善；然而，偶尔关节疼痛可能会持续数月或数年。死亡率约为千分之一。幼儿、老年人以及患有其他健康问题的人群面临更严重疾病的风险。

实验原理：

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被有基孔肯雅热病毒E1抗原(CHIKV E1)捕获抗体的微孔中，依次加入样本、标准品、生物素标记的检测抗体，HRP酶结合物，中间经过温育和洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样本中的基孔肯雅热病毒E1抗原(CHIKVE1)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样本浓度。

特异性：可检测样本中的CHIKV E1，且与其类似物无明显交叉反应。

实验类型： 双抗体夹心法

检测范围：1.56-100ng/mL（特殊要求可定制）

灵敏度：0.65ng/mL

别名：CHIKV E1

保存温度： 2-8℃   有效期：6个月

样本类型： 血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体

标本收集与试剂准备:

1、血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

2、洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）

3、标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第一至七管中分别加入标准品/样品稀释液300ul。在第一管中加入标准品溶液300ul（标准品浓度），置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出300ul弃去，第七管为空白对照。(建议标准曲线使用以下浓度: 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank)。

4、生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。

5、ABC复合物工作液配置:使用前20分钟，用ABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液，当日使用，剩余弃之。

6、如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

检测程序:

1、微孔板使用前洗板2次，向滤纸印干后，请立即使用。

2、加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板混匀后置37℃，90分钟,然后甩去酶标板内液体，向滤纸上印干，不洗板。

3、每孔加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，60分钟。

4、洗板：用洗涤液将微孔板充分洗涤3次，向滤纸上印干。

5、每孔加入1×的ABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。

6、洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤5次，向滤纸上印干。

7、每孔加入底物工作液90ul，混匀后置37 ℃暗处反应3-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。

8、每孔加入50ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果判断与计算：

1、所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。

2、以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。

注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中2 个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

5、仅用于科研，不能用于临床诊断！