小鼠11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-EET)ELISA试剂盒

实验原理：钰博生物生产的 ELISA 试剂盒采用“夹心法”:将捕 获 mouse 11,12 EET 抗体包被于酶标板上，捕获样品及 标准品中的靶蛋白，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SABC 复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合 物，加入 TMB 显色液后，若反应孔中有靶蛋白则显蓝 色，加入终止液变黄色，检测过程中游离的成分均被洗 去，用酶标仪在 450 nm 处测 OD 值，靶蛋白浓度与 OD 值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白 的浓度。

特异性：可检测样本中的CHIKV E2，且与其类似物无明显交叉反应。

实验类型： 双抗体夹心法

检测范围：15.6-1000ng/ml（特殊要求可定制）

别名：11,12-EET

保存温度： 2-8℃   有效期：6个月

样本类型： 血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体

标本收集与试剂准备:

1、血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

2、洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）

3、标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第一至七管中分别加入标准品/样品稀释液300ul。在第一管中加入标准品溶液300ul（标准品浓度），置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出300ul弃去，第七管为空白对照。(建议标准曲线使用以下浓度: 1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank)。

4、生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。

5、ABC复合物工作液配置:使用前20分钟，用ABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液，当日使用，剩余弃之。

6、如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

检测程序:

1、微孔板使用前洗板2次，向滤纸印干后，请立即使用。

2、加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板混匀后置37℃，90分钟,然后甩去酶标板内液体，向滤纸上印干，不洗板。

3、每孔加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，60分钟。

4、洗板：用洗涤液将微孔板充分洗涤3次，向滤纸上印干。

5、每孔加入1×的ABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。

6、洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤5次，向滤纸上印干。

7、每孔加入底物工作液90ul，混匀后置37 ℃暗处反应3-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。

8、每孔加入50ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果判断与计算：

1、所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。

2、以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。

注意事项:

1、在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。

2、洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3、检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中2 个月内用完。

4、试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

5、仅用于科研，不能用于临床诊断！