猪Apelin蛋白(APLN)ELISA试剂盒

使用目的： 本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本 中流行性腹泻病毒抗体（PEDV-Ab)表达。

实验原理： 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪流行 性腹泻病毒抗体（PEDV-Ab)表达。用纯化的抗原包被 微孔板，制成固相抗原，可与样品中流行性腹泻病毒 抗体（PEDV-Ab)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和 其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显 色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的 作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长 下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从 而判定标本中猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV-Ab）的 存在与否。

标本要求： 

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献 进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避 免反复冻融 

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根 过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性 对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔（空白 对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相 同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、 阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释 液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品 加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动 混匀， 

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔 加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次， 拍干。 

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 

7. 温育：操作同 3。 

8. 洗涤：操作同 5。 

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟. 

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色 立转黄色）。 

11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各 孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算和结果判定： 

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对 照平均值≤0.20 临界值（CUT OFF）

计算：临界值=阴性对照孔平 均值+0.15 

阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者 为猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV-Ab)阴性 

阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者 为猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV-Ab)阳性。

注意事项： 

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分 不得混用。 

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分 钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板 条应装入密封袋中保存。 

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中 加温助溶，洗涤时不影响结果。 

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 

5．底物请避光保存。 

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波 长检测时，参考波长为 630nm 

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处 理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期： 

1．试剂盒保存：2-8℃。 

2．有效期：6 个月。