人IFN beta基因探针法qPCR试剂盒（不含内参）

Human IFN beta Gene Probe qPCR Kit

【产品名称】 人IFN beta基因探针法qPCR试剂盒（不含内参）

【包装规格】 50T/盒

【货号】 YB-72592NPR

【产品及特点】

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏度高，可以达到10拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性结果。

4. 特异性高，引物是根据人IFN beta基因DNA高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6. 本产品足够50次25 μL体系的探针法qPCR反应。

7. 本产品只能用于科研。

【试剂组成】

说明：1）不同批号的试剂盒组分不可交互使用。2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃, 避光保存、运输、反复冻融少于7次，有效期12个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR检测仪。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 DNA 提取

根据您实验室的具体情况和样品类型，选择适当的提取策略方法，为了使实验结果稳定、

2. 稀释标准曲线样品（以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）

由于标准品浓度非常高， 因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。

2.1 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。

2.2 用带芯枪头分别加入45 μL 荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同。

2.3 在6号管中加入5 μL1E7拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

2.4 换枪头，在5号管中加入5 μL1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得 1E5 拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

2.5 换枪头，在4号管中加入5 μL1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得 1E4 拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

2.6 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品，放冰上待用。

3. Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）

3.1 从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温（20～25℃) , 待完全溶解后振荡混匀并低速离心10s。

3.2 根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份），每测试反应体系配制如下表：

根据测试样品的数量计算好各试剂的使用量，加入到适当体积试管中，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装20 μL反应混合液，盖上管盖后将PCR反应管转移至样本处理区。

3.3 加样（在样本处理区进行）

将制备的核酸样本、阳性对照（1E1-1E6拷贝/μL）各取5 μL分别加入PCR管中，盖好管盖，低速离心 30秒后立即进行PCR扩增反应。

将 PCR 反应管转移至样本准备区，剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。

4. 上机检测（在检测区进行）

将 PCR 反应管放入荧光PCR检测仪内，按照下表设置核酸扩增相关参数，选择FAM荧光通道，具体检测通道设置可参照各仪器使用说明。

推荐循环参数设置：

5. 结果分析判定

5.1 结果判断

当同时满足以下条件时可判定试验成立，否则试验无效：

阳性对照：FAM 通道Ct值≤35；

阴性对照：FAM 通道无Ct值或Ct值＞35。

5.2 检测结果

(1) 进行定量检测时，需以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA拷贝数浓度的log值，再推算出其拷贝数浓度。

(2) 进行定性检测时，如果无Ct或Ct大于或等于35，则为阴性。如果Ct小于35，则为阳性。

【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行；

试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

反应液应避光保存；

反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行， 以免交叉污染；

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

本产品仅供科研使用。不能用于人和动物治疗等其它临床诊断使用！