在线客服1号
新城疫病毒通用型核酸检测探针法PCR试剂盒
【产品名称】 新城疫病毒通用型核酸检测探针法PCR试剂盒
【包装规格】 50T/盒
【货号】 YB-72596NPR
【产品简介】
新城疫病毒引起的新城疫是最具破坏性的疾病之一，传播速度极快，能造成鸡死亡、蛋鸡产蛋量下降，肉鸡饲料转化率降低，具有极强得传染性。该病毒能引起家禽呼吸道发生病变，且呈急性高度接触性，对我国养禽业正常发展带来了巨大的危害。为此，本公司以探针法qPCR技术为基础开发了新城疫病毒的检测试剂盒。
【试剂组成】
成分 | 编号 | 规格 |
酶混合液 | 试剂一 | 500 µL×1 管 |
PCR反应液 | 试剂二 | 400µL×1 管 |
模板稀释液 | 试剂三 | 1 mL×1 管 |
高浓度标准品 （107copies/μL） | 试剂四 | 50 µL×1 管 |
说明书 | 1份 |
注意：高浓度标准品用于制备绝对定量的标准曲线，但易污染检测样本，需要在远离样本的区域
用带滤芯的枪头先稀释成104 copies/μL，方可作为阳性对照使用。
【储存条件及有效期】
-20℃, 避光保存、运输、反复冻融少于7次，有效期12个月。
【适用仪器】
ABI、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量PCR检测仪。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
核酸提取
请参照相关商品DNA提取试剂盒说明书进行操作即可。
2. Probe PCR反应（20μL体系，在样品制备室进行，冰上操作）
2.1 从-20℃以下冰箱中取出试剂盒，在室温融化后置于冰上。待完全溶解后上下颠倒轻轻混匀（请不要使用振荡器进行混匀），尽量避免出现泡沫并低速离心10s。
2.2 根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份），每测试反应体系配制如下表：
试剂 | 酶混合液 | PCR反应液 |
用量(样本数为N) | 10 μL | 8 μL |
根据测试样品的数量计算好各试剂的使用量，加入到适当体积试管中，充分混合均匀，向每个PCR管中各分装18 μL反应混合液，盖上管盖后将PCR反应管转移至样本处理区。
2.3 加样（在样本处理区进行）
将制备的核酸样本、阳性对照（104 copies/μL）各取2 μL分别加入PCR管中，盖好管盖，低速离心30秒后立即进行PCR扩增反应。
将PCR反应管转移至样本准备区，剩余试剂放回-20℃以下冰箱冷冻保存。
3. 上机检测（在检测区进行）
将PCR反应管放入荧光PCR检测仪内，按照下表设置核酸扩增相关参数，选择FAM荧光通道。
推荐循环参数设置：
阶段 | 循环数 | 温度 | 时间 | FAM荧光信号采集 |
预变性 | 1× | 95℃ | 10 min | 否 |
变性 | 40× | 95℃ | 15 s | 否 |
退火/延伸 | 60℃ | 40 s | 是 |
4. 结果分析判定
4.1 结果判断
当同时满足以下条件时可判定试验成立，否则试验无效：
阳性对照：FAM通道Ct值≤35；
阴性对照：FAM通道无Ct值或Ct值＞35。
4.2 检测结果
Ct值≤35，且扩增曲线为典型的S型，则为阳性；如果无Ct或Ct大于或等于35，则为阴性。
【注意事项】
所有操作严格按照说明书进行；
试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
反应液应避光保存；
反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行， 以免交叉污染；
实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
本产品仅供科研使用。不能用于人和动物治疗等其它临床诊断使用！