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布鲁氏杆菌属通用可视化-荧光染料LAMP试剂盒
【产品名称】 布鲁氏杆菌属通用可视化-荧光染料LAMP试剂盒
【包装规格】 50T/盒
【货号】 YB-70003QK
【产品简介】
本公司开发了简单快捷的布鲁氏杆菌属通用可视化-荧光染料LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2. 恒温扩增，可以不需要荧光PCR等贵重仪器。
3. 含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果，也可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
4. 特异性高，根据布鲁氏杆菌属DNA保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
6. 本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
7. 本产品足够50次25 μL体系的荧光及可视化LAMP扩增。
8. 本产品只能用于科研。
【试剂组成】
成分 | 编号 | 规格 |
LAMP Master Mix (可视化染料-荧光染料双染料) | 试剂一 | 450 µL×1 管 |
引物混合液 | 试剂二 | 450 µL×1 管 |
阳性对照（105copies/μL） | 试剂三 | 70 µL×1 管 |
说明书 | 1份 |
注意：
1) 不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
2) 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
3) 自备：无DNA/RNA酶的1.5mL离心管，0.2mL PCR反应管，滤芯吸头(规格:10μL,200μL,1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器。
4) 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
5) 禁止与其他品牌/自配的试剂混用，否则会影响使用效果。
【储存条件及有效期】
1. 应置于-20℃以下冷冻避光贮存，有效期为12个月，详见外包装标签。
2. 采用泡沫盒加冰密封进行运输，温度不超过8℃。
3. 开封后各组分-20℃以下冷冻避光贮存，试剂现配现用。
【注意事项】
l 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。正式实验前选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
l 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
l 静止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
l 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
l 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
l 避免皮肤或粘膜与试剂接触。实验完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
核酸提取
请参照相关商品DNA提取试剂盒说明书进行操作即可。
2. LAMP反应（25 μL体系）
2.1 从-20℃以下冰箱中取出试剂盒，在室温融化后置于冰上。待完全溶解后上下颠倒轻轻混匀（请不要使用振荡器进行混匀），尽量避免出现泡沫并低速离心10s。
2.2如果有N个DNA纯化样品，则最好设置N+2个LAMP扩增，增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+2个PCR管中加入下列成分：
成分 | N个样品管 | LAMP阴性对照 | LAMP阳性对照 |
LAMP Master Mix | 各9 µL | 9 µL | 9 µL |
引物混合液 | 各9 µL | 9 µL | 9 µL |
N个样品DNA | 各7 µL | 不加 | 不加 |
超纯水 | 不加 | 7 µL | 不加 |
阳性对照 | 不加 | 不加 | 7 μL |
2.3 如果使用金属浴或水浴保温，没有热盖，则每个反应管中加入50 μL自备的PCR级石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发到管盖下方凝集，反应体积变化，会严重影响反应效率，增加假阳性率。最后置于65℃保温90分钟进行扩增。
2.4 如果使用常规PCR仪进行LAMP反应，设置程序时必须打开热盖，设置成65℃保温90分钟进行扩增。
2.5 如果使用荧光定量PCR仪，则设置90次循环，每次65℃保温1分钟，每分钟在SYBR通道采集一次荧光信号。
3. 结果分析判定
3.1 扩增结束后肉眼观察结果判断阴性和阳性。典型的结果见下图：左边管为阴性，右边管为阳性。
结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物呈现阳性而阴性对照为阴性，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物呈现阴性，则操作有问题或者试剂盒有问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）也呈现阳性，则说明LAMP样品或试剂有扩增产物的污染，需要注意操作的规范性。3.2. 荧光分析（仅限于用qPCR仪进行反应的场景）：样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。
3.3 当实时荧光检测和可视化检测同时使用时，如果不一致，以实时荧光LAMP的数据为准。一般可视化结果滞后实时荧光检测结果20-30分钟，也就是说，在qPCR仪上第30分钟时呈现阳性的样品，其颜色变化在第50-60分钟时才能观察到。
【注意事项】
所有操作严格按照说明书进行；
试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
反应液应避光保存；
反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行， 以免交叉污染；
实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
本产品仅供科研使用。不能用于人和动物治疗等其它临床诊断使用！