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T4 RNA连接酶2
| 截短型T4 RNA连接酶2为T4 RNA连接酶2的突变体，能特异性将5’末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3’ OH末端。与野生型与T4 RNA连接酶2相比，截短型T4 RNA连接酶2催化的的连接反应无需ATP，但需预腺苷化接头，这样连接反应的背景最大程度的降低，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性。该酶可用于二代测序small RNA 的文库构建，优化了接头的连接过程。 |  |
组分 | |
| 组分名称数量T4 RNA Ligase2, truncated K227Q (200 U/μl)20 μl/100 μl10×T4 RNA Ligase Buffer500 μl50% PEG 8000500 μl | |
应用 | |
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活性定义 | |
| 200单位指在标准反应体系，25℃反应条件下，1h能将80%的31-merRNA连接到预腺苷化的17-merDNA末端所需的酶量。 | |
储存 | |
| -20℃可保存3年。 | |
使用注意事项 | |
| 1. 1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时不需要ATP。 2. 最佳反应温度37℃，65℃ 10min可使该酶失活。 3. 该酶的连接接头需要5’-预腺苷化，不能连接磷酸化底物。 4. 该酶不能连接双链DNA或RNA。 5. 加入终浓度5~10% PEG 8000可提高连接效率。 | |