人葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)ELISA试剂盒

产品规格：96T

目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase) 活性。

检测范围：10U/L - 320U/L

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)水平。用纯化的人葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包 被 单 抗 的 微 孔 中 依 次 加入葡萄糖-6- 磷酸酶(G-6-Pase) ， 再 与 HRP 标 记的葡萄糖-6- 磷酸酶(G-6-Pase)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase) 活性浓度。

试剂盒组成：

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管4收集。离心 20 分钟左右（2000-3000转/分） 。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（2000-3000转/分） 。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含 NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1. 标准品：其起始活性为 640U/L(贮液)。再准备5个稀释标准品的 EP 管，每个EP 管中加入150μL 的标 准 品 稀 释 液 ， 如 图 所示依次倍比稀释成640U/L,320U/L,160U/L,80U/L,40U/L,20U/L, 标准品稀释液(0U/L)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液

   

   Tube	0	1	2	3	4	5
   U/L	640	320	160	80	40	20

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μ l，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂 B50μ l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

注意事项：

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 

8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9． 本试剂不同批号组分不得混用。