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动物组织直扩PCR试剂盒
| RAPA3G DNA聚合酶为经电子重构架的第三代Taq DNA聚合酶，第三代DNA聚合酶具有高度的杂质耐受性、长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量等特征，从而使得RAPA3G系列产品可用于粗制样品的直接扩增，无需核酸纯化步骤。杂质耐受性方面，该酶可耐受植物中的多糖多酚；全血、血清、血浆中的肝素、高浓度的血红蛋白、甘油三脂；乙醇；胍盐；SDS等强PCR抑制剂。在血液直扩PCR实验中，RAPA3G PCR Mix性能与KAPA3G DNA聚合酶展现出同等的表现，其性能表现优于二代聚合酶（血液扩增Hemo KlenTaq Mix）。在植物直扩PCR实验中，RAPA3G PCR Mix在配合DNA释放剂的条件下与KAPA3G Plant PCR试剂盒性能一致。 长片段扩增能力方面，使用该酶可轻松扩增8kb的基因组片段，20kb的λ DNA，8kb的cDNA。该酶具有6kb/min以上的扩增速度，可显著的缩短PCR的扩增时间，在常规测试条件下，10s的延伸时间可完成1kb的基因组DNA扩增。在PCR扩增成功率方面，与其它类型的PCR扩增试剂对比中，RAPA3G PCR Mix表现出卓越的PCR扩增成功率。此外，该酶包含一定比例的RAPA HiFi超保真DNA聚合酶，因此其具有一定的保真性能（经蓝白斑测试，其保真性能约为Taq DNA聚合酶的56倍）。另外，RAPA3G系列产品均采用HaiGene专有的热启动技术，确保50°C以下完全无活性，仅有95°C加热5min以后才能恢复其活性，因此可最大限度的提高扩增的特异性，减少非特异性产物的产生。该PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的外切酶活性和3'-5'的外切酶活性，产物部分带有"A"尾巴，部分为平末端，因此产物均可用于TA克隆或平端克隆。 | ||
特征和用途 | ||
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RAPA3G DNA聚合酶对抑制物耐受性 | ||
| SDS0.01%胍盐0.25%乙醇5%全血15%肝素0.1IU/ml血清15%Trizol0.5%血浆2%血红蛋白30μM尿液5% | ||
50μl体积建议添加的样品量 | ||
| 抗凝全血2.5 μl培养细胞>100个血清2.5 μl组织0.1mg尿液2.5 μl毛发囊1-3个血浆1 μlgDNA1-400ng植物叶片2mmcDNA1-400ng植物粗提物2-4 μl质粒0.1-10ng | ||
储存 | ||
| 长期储存置于-20°C以下，可保存2年，避免反复冻融；短期使用置于4°C（3个月）保存，一经融化后请放置于4°C，勿再冻存。 | ||
反应实例 | ||
| 1. 模板适应性强，长片段和短片段都可有效扩增 | ||
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| Lane 1：λDNA 500bp, 2：λDNA 1kb, 3：λDNA 2kb, 4：λDNA 5kb, 5：λDNA 8kb, 6：λDNA 15kb, 7：λDNA 20kb, 8：human 500bp ,9：human 1kb, 10：human 2kb ,11：human 5kb, 12：human 8kb, 13：cDNA 166bp, 14：cDNA 552bp, 15：cDNA 960bp, 16：cDNA 1574bp, 17：cDNA 1705bp, 18：cDNA 2755b,p 19：cDNA 4128bp, 20：cDNA 7600bp, M：DNA Marker 10000 | ||
| 选取三种DNA模板，使用RAPA3G PCR Mix进行扩增，循环数统一为28 cycles，结果如上图所示，对于不同种类DNA模板和不同长度的靶基因，RAPA3G PCR Mix均有良好的扩增性能。 | ||
| 2. 对于粗制样品DNA具有极强的耐受性 | ||
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| 分别以人全血、血清、叶片粗制品DNA以及大豆种子粗制品DNA为模板，使用RAPA3G PCR Mix进行PCR扩增，结果如上图展示，各种粗制样品都有良好的扩增，其中全血和血清可耐受15%。 | ||
| 3.扩增灵敏度高，λDNA模板低至0.1pg也可以有效扩增 | ||
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| 以λDNA为模板，选取不同模板使用量，采用RAPA3G PCR Mix进行扩增2kb靶基因，循环数统一为28 cycles，结果如上图所示，λDNA模板低至0.1pg也可以有效扩增 | ||