RCA滚环扩增试剂盒
滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)是近几年发展起来的一种核酸恒温扩增方法。以环状DNA为模板,通过一个短的DNA引物(与部分环状模板互补),在phi29 DNA 聚合酶催化下将dNTPs转变成单链DNA,此单链DNA包含成百上千个重复的模板互补片段。这种方法不仅可以直接扩增DNA和RNA,还可以实现对靶核酸的信号放大,灵敏度达到一个拷贝的核酸分子,因此在核酸检测中具有很大的应用价值和潜力。 因其高灵敏度、高特异性和可操作性,RCA技术在基础研究、实际检测、医疗诊断及纳米材料等方面都有很好的应用,结合细胞原位检测、单核苷酸多态性SNPs,蛋白质分析、免疫芯片和全基因组的扩增等研究都能发挥其巨大的优势。 本滚环扩增试剂盒配备的phi29 DNA聚合酶具有链置换和连续合成特性,可连续合成长达70kb的DNA片段。另外,该酶具有3’→5’外切酶校读功能,合成的DNA片段保真性高。试剂盒配备的Random Hexamers为6碱基随机引物可对目标分子进行指数放大(通常放大10000倍)。 | ||
主要特征 | ||
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组分 | ||
名称100Tphi29 DNA Polymerase (20 U/μl)50 μl10×phi29 Buffer1 mlYeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl)25 μl10mM dNTP Mixture200 μl25XRandom Hexamer100 μl | ||
储存 | ||
-20℃可保存3年,避免反复冻融。 | ||
实例 | ||
1. 应用本试剂盒以pEasy质粒为模板, 30℃作用5h。泳道1-5是模板浓度分别为0.0004,0.004, 0.04,0.4,1 ng/μl ,泳道6-10分别为泳道1-5相对应的RCA产物用PstI酶切后的产物,M 为D10000 DNA Marker。 | ||
2. 应用本试剂盒以人基因组为模板, 30℃作用5h。泳道1-6是模板浓度分别为 0.0004,0.002,0.004,0.04,0.4,1 ng/μl ,M 为D10000 DNA Marker。 | ||
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