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DNA/RNA IsoAmp MasterMix(用于LAMP/HDA/RCA/CPA恒温扩增用)
| 在核酸分子的恒温扩增过程中，无论采用LAMP、HDA、RCA、CPA、SMAP等扩增技术，这种高速度的扩增特性，均不可避免的引起假阳性扩增。这种假阳性的扩增情况在LAMP扩增中表现尤为明显，由于LAMP扩增用到很高浓度的引物，因此难免保证有少量错配和引物Dimer，这些轻微的污染都会导致在LAMP高速扩增中造成假阳性。HaiGene优化的反应缓冲液，配合独有的显色技术和阴性控制技术建立的预混恒温mix系列产品，可高灵敏度、高特异性的用于LAMP HNB变色、LAMP红黄变色、LAMP OG变色、LAMP SYBR Green荧光检测、HDA荧光检测、RCA荧光检测、CPA荧光检测、SMAP荧光检测的扩增反应。在LAMP扩增实验中，与其它公司提供的 DNA/RNA LAMP MasterMix 或 LAMP Mix相比，得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能，HaiGene的 Bst 4.0 IsoAmp Red MasterMix具有更快的扩增速度和杂质耐受性。 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶对dUTP底物的超强识别能力，扩增反应所需的核苷酸底物dTTP可被dUTP完全取代，因此扩增产物均包含dUTP，在配合热敏UDG的情况下，气溶胶污染物，将会在起始反应阶段被彻底清除。而后续热敏UDG在65℃条件下3min内，完全不可逆失活；从而既能消除污染物，又能保证核酸正常扩增。应用该试剂，在标准LAMP扩增反应中，105拷贝的污染物可完全消化至不可检出水平。因此，应用该试剂能大大降低LAMP反应中由于气溶胶污染造成的假阳性信号。 | ||
使用特征 | ||
| Bst 4.0 MasterMix特点单组分预混扩增用酶Bst3.0+ThermoStable VDNA模板★★★★★RNA模板★★★★★扩增速度★★★★★反应温度60-68℃杂质耐受性★★★★★ | ||
以2019-nCov核酸扩增为例三种方法的性能比较 | ||
| 红黄变色可视化（Cat.No.:A3824-01）橙绿变色可视化（Cat.No.:A3824-02）荧光法（Cat.No.:A3824-03）试剂信息 靶标均为N基因，冻干Assay均相同；搭配不同Buffer实现不同的显色。检测方法肉眼观测肉眼观测SYBR Green荧光检测设备水浴锅、金属浴、PCR仪水浴锅、金属浴、PCR仪定量PCR或恒温荧光仪阳性判读方式黄色为阳性绿色为阳性有扩增曲线为阳性反应温度60-65℃反应时间30min20min15-18min灵敏度（100%检出）10 copies/test10 copies/test10 copies/test单copy检出率10-30%30-50%30-50%假阳性比例<1%<1%<1%抗杂质能力+++++++++++++操作通量可高通量检测不适宜大量样本30-50% | ||
实例展示 | ||
| 1、A3824-01 红黄变色反应（肉眼观察） 以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 30min 后。 | ||
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| 2、A3824-02 搭配 OG 橙绿变色反应管（A3821）（肉眼观察） 以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 20min 后。 | ||
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| 3、A3824-03 用于荧光检测（便携式恒温检测仪） 以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 26min 后。 | ||
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| 4、A3802 用于HNB变色扩增反应 采用环引物对7个样本（HHV-6 DNA核酸模板进行恒温HNB变色检测反应），NTC为不加模板的对照，产物以HNB显色如下图。 | ||
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| 5、首先使用含dUTP的Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix扩增获得三种基因产物（AFSV P72,Covid-19 N Gene-1，Covid-19 N Gene-2），然后以105拷贝的含U产物作为模板，分别用Bst4.0 SYBR Green IsoAmp Mix（with UDG）和Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix 进行扩增，反应结束后统计两组之间的Ct，结果为：UDG组在30min内几乎不起峰，无信号；未加UDG组均在4min之前起峰，表明该Bst4.0 SYBR Green IsoAmp Mix（with UDG）具有良好的去除残留模板的能力。 | ||
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| 关于LAMP核酸扩增的技术专利与商标：LAMP核酸扩增技术专利由日本荣研化学株式会社所拥有（专利号CN1420928A/CN1222614C）。除此外，LAMP商标也隶属日本荣研化学株式会社。关于LAMP的商业化核酸检测专利和商标授权使用，请联系荣研生物科技(中国)有限公司。HaiGene提供的恒温扩增原料用酶与预混Mix系列产品，可用于LAMP扩增反应，但并不仅限于LAMP扩增，还可以进行RCA (Rolling Circle Amplification)、HDA(Helicase Dependent Amplification)、 SMAP（Smart Amplification Process）、CPA(Crossing Priming Amplification)等恒温扩增方法。 | ||