成骨细胞矿化结节染色液(四环 素法)

产品简介：

骨代谢是破骨细胞骨吸收与成骨细胞骨形成的动态平衡过程。成骨细胞负责骨基质的合成、分泌、矿化，是骨重建激活或终止的控制者，它在骨组织的创伤修复、骨组织的生长发育、骨量平衡中起着重要作用，是骨质疏松、骨折等骨病研究的主要焦点。成骨细胞分化是其主导骨形成的前提与基础。在成骨分化过程中，其基本的生物学特征是骨基质合成、分泌、矿化及成熟，而矿化结节是成骨细胞分化成熟的标志，同时也是成骨细胞行使成骨功能的主要形态学表现，观察成骨细胞的矿化结节是研究成骨细胞分化的常用手段之一。

成骨细胞矿化结节染色常用方法有四环 素法和茜素红S法，四环 素染色法是利用四环 素与矿化结节中的钙盐形成荧光的磷酸复合物，可用荧光显微镜观察。

自备材料：

1、磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁)

2、培养基

3、蒸馏水

4、荧光显微镜

操作步骤(仅供参考)：

1、成骨细胞经培养，胰 酶消化，接种培养于6孔板中，每孔有1x105个细胞。

2、培养基中添加1%-2%四环 素溶液，细胞连续观察、换液，培养14天。

3、小心吸除培养液，磷酸缓冲盐溶液(1×PBS)洗涤2次,每次3min。

4、加入足量Ob固定液固定15min。

5、磷酸缓冲盐溶液(1×PBS)洗涤2次,每次3min。

6、加入DAPI染色液染色5-8min。

7、轻轻吸除染色液,用磷酸缓冲盐溶液(1×PBS)洗涤2次,每次3min。

8、直接在荧光显微镜快速观察，或抗荧光封片剂封片后再观察。

注意事项：

1、四环 素溶液为无菌溶液，可以一次性分装小份保存，注意避免染菌；使用时常温溶解后与培养基按1:100比例混合后使用。

2、Ob固定液宜挥发，开启后应密封保存。

3、DAPI染色后应尽快观察，以免荧光消失，影响观察。也可以用抗荧光淬灭封片剂处理。

4、DAPI不宜反复冻融，否则容易失效。且对人体有刺激性，请注意做好防护。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 6个月有效。