农杆菌EHA105

  货    号：   YB7836

  规    格：    200ul冻干粉

 培 养 基：  LB 琼脂培养基（酵母提取物 5.0 g ，蛋白胨 10.0 g ，NaCl 10.0 g ，琼脂 15.0 g ，蒸馏水 1.0 L ，pH 7.0 。121℃ ,  15min 灭菌。）

 培养条件 ：温度：37℃

 气体环境 ：好氧

使用方法

A. 活化

1. 准备 LB 平板 2 块；

2. 无菌环境下，在冻干管中打入 0.5mL 液体培养基，充分溶解冻干粉；

3.将悬液在平板划线培养，2块平板，18-24H长出单菌落；

B. 感受态制备（供参考）

1. XL10-Gold 大肠杆菌平板上挑取一个单菌落接于 3ml LB 液体培养基的试管中，37 ℃震荡培养过夜。

2. 取 1ml 菌液转接到一个含有 50ml LB 液体培养基的锥形瓶中，37 ℃震荡培养 2~3h，A600 应在 0.4~0.5 之间，细胞数务必﹤108CFU/ml。

3. 用移液枪取 1ml 菌液转移到 1.5 ml 离心管中，冰上放置 10min  。

4. 离心 10min ，4000r/min。

5. 倒尽培养液，用冰冷的 0. 1mol/l CaCl2  200 µl 悬浮沉淀，立即放在冰上保温 30min 。

6. 低温离心 10min ，4000r/min ，回收细胞。

7. 用冰冷的 0. 1mol/l CaCl2 200µl 悬浮细胞。

8. 分装细胞，毎 200ul 一份，此细胞为感受态细胞。